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关于I型胶原蛋白提取改进的研究

 

对以往I型胶原蛋白提取做出改进后的方法。

方法:取鼠尾浸入75%酒精消毒30min,移入PBS液中洗2次,去皮、抽取鼠尾腱,放入PBS液中洗2次,高速组织粉碎机粉碎后放入3%醋酸(每尾200mL),48h1.2g离心2h。吸取上清加入30%浓盐水40mL盐析。离心4000g30min。将沉淀溶入50mL0.1%醋酸内,置透析袋内与500mL1 mmol/LHCl透析48h,其间换水5次。这样可得到透明清亮的胶原溶液。加入015mL氯仿,敞开瓶口,用无菌纱布包住,置无菌工作台48h使氯仿挥发。取5mL溶液经 SEXTRYTM冷冻干燥机冷冻干燥,定量胶原浓度为3.5g/L

    常用I型胶原的提取一般采用多次超速离心的办法。经改进,本法只进行了2次超速离心,减少了步骤。一般在I型胶原的提取过程中要不断使用不同浓度的NaCl/0.05mol.L1TrisHCl缓冲液,反复进行离心、抽提。本方法将其改为在3%醋酸的酸性条件下,直接加入40mL30%浓盐水。不仅减少了步骤,还节省了试剂和时间。